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Técnicas de Assisted Hatching

1.1 - Preparo da solução de tyrode´s

- Ajustar pH para 2.1 com N/5 HCl - Filtrar - ( 0.45mm ) e armazenar a - 20 °C

- Ajustar pH para 2.1 com N/5 HCl

- Filtrar - ( 0.45mm ) e armazenar a - 20 °C

1.1.1 - Utilizando a solução de Tyrode´s ( Irvine Scientific )

Solução pronta para uso - Tyrode's Solution Acidified (pH 2.1 - 2.5) - Ref. 99252.

1.2 - Principais indicações

- Falhas de Implantação

- Idade da Paciente

- Embiões Congelados e Descongelados

1.3 - Equipamento

O equipamento utilizado consiste num Microscópio Invertido Nikon (Eclipse ou Diaphot) com contraste de fase Hoffman equipado com dois manipuladores motor-driven coarse- control e dois micromanipuladores hidráulicos (MM-18 e MO - 109 Narishige Co Ltd, Tokyo, Japão). As micropipetas de holding e hatching são colocadas no segurador e controladas por dois microinjetores IM-6 (Narishige Co Ltd).

1.4 - Técnica

Após 72 horas (Dia 3) da aspiração dos oócitos, onde os embriões se encontram num estágio de desenvolvimento entre 8 a 10 células fazemos o hatching com a solução de Tyrode's.

É feito o ajuste do micromanipulador. A placa para a realização do procedimento é preparada com uma gota central de 5ml da solução de Tyrode's e rodeada por 8 gotas com meio de injeção onde 1 embrião deverá ser colocado por gota. Cobrir com óleo mineral . O procedimento é realizado em platina aquecedora a 37°C.

Carregar a pipeta de hatching com a solução de Tyrode's e com a pipeta de holding fazer a fixação do embrião . Posicionar a pipeta de hatching em posição 3 horas , escolhendo um espaço entre dois blastômeros ou uma área de fragmentação embrionária. Borrifar a solução sobre a zona pelúcida movimentando a pipeta de hatching para cima e para baixo criando um buraco na zona pelúcida. Remover o excesso da solução de Tyrode's. Repetir o procedimento em todos os embriões. Lavar os embriões em meio de cultura e realizar a transferência 2 horas após o procedimento.



 Este site foi feito no âmbito de um trabalho de Área de Projecto realizado pelos alunos do 12ºE da Escola Secundária da Sé - Guarda
Última actualização: 18/05/07.